SPI-CHEM™ SPI-PON™ KIT 812
Instrucciones de uso
SPI-CHEM™ SPI-PON™ KIT 812 INSTRUCCIONES DE USO
CUIDADO:
Lea cuidadosamente todas las instrucciones y advertencias en las etiquetas del recipiente previo al uso de este kit.
La resina SPI-PON 812 puede usarse en diversas aplicaciones de fijación tanto en ciencias biológicas como de materiales. Un bloque de resina curada de dureza requerida, para casar con el material fijado, pude hacerse variando las proporciones de DDSA (suavizador) y NMA (endurecedor). Es bien conocido que los especímenes duros en un bloque de resina suave, se desprenderán del bloque, mientras que materiales de muestra suaves se seccionarán de manera desigual si se fijan en una formulación de resina dura. Adicionalmente a la amplia variedad de durezas que pueden obtenerse, otras ventajas incluyen la penetración mejorada (en tejido biológico), contraste y facilidad para obtener delgadas secciones estables.
Formulaciones
Puede usarse una o más de las formulaciones siguientes para la mayoría de las aplicaciones:
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COMPONENTE DE RESINA | FORMULACIÓN DE DUREZA
MEDIA TÍPICA | FORMULACIÓN
TÍPICA DURA |
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SPI-PON 812 | 16.2 ml | 9.8 ml |
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DDSA | 10.0 ml | 3.3 ml |
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NMA | 8.9 ml | 6.9 ml |
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DMP-30 | 0.5 ml a 0.7 ml | 0.3 ml a 0.4 ml |
De manera similar, la siguiente formulación combinada SPI-PON-Araldite de Mollenhauer proporciona bloques duros, buen contraste y facilidad de seccionado.
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COMPONENTE DE RESINA | FORMULACIÓN MOLLENHAUER SPI-PON-ARALDITA |
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SPI-PON 812 | 10.0 ml |
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ARALDITE 6005 | 10.0 ml |
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DDSA | 24.0 ml |
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DMP-30 | 0.7 ml a 0.9 ml |
1DMP-30 (acelerador), se añade a cualquiera de las formulaciones anteriores, con un mezclado cuidadoso, justo antes de usarse. Adiciones de DMP-30 son a un nivel de 1.5 a 2.0% (por volumen.). Al aumentar la cantidad de DMP-30 se incrementa la "velocidad de curado".
MEZCLA DE COMPONENTES DE RESINA
La preparación y mezclado de los componentes de resina, debe ser cuidadosa y siempre debe realizarse en una campana de humos o en un recipiente cubierto y por un periodo de al menos 5 a 10 minutos. Después que que el DMP-30 ha sido medido cuidadosamente, y mezclado completamente en la resina seleccionada, se puede usar la formulación completa para impregnar o incrustar el material muestra.
Evite el contacto de la mezcla con la humedad. La mezcla sin DMP-30 es estable por 6 meses a 4°C, o por varios días a temperatura ambiente. Cuando se refrigera, la mezcla, en su recipiente cerrado, debe dejarse que se equilibre a temperatura ambiente antes de usarse, para evitar la condensación de humedad.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La muestra para infiltración y fijación de resina debe estar seca. Las muestras biológicas, fijadas y deshidratadas mediante alcohol absoluto son más deshidratadas en dos cambios de 15 minutos de óxido de propileno. La infiltración se logra usando la formulación completa y óxido de propileno (1:1), mientras se agita suavemente durante al menos 1 hora. La infiltración de la muestra es continuada en al menos un cambio de la formulación completa durante 1 hora.
La fijación completa de la muestra se logra colocando una muestra en alícuota de la formulación completa, localizada en moldes adecuados de fijación sencillos o capsulares.
El endurecido o polimerización de las resinas anteriores se puede lograr siguiendo el curado en un horno a 60°C durante 24-48 horas, después de cuyo tiempo, se dejan enfriar los moldes a la temperatura ambiente para una ultramicrotomía subsecuente.
REFERENCIAS
1. Luft, J.H.J. Biolfís. Bioquím, Citol. 9, 409 (1961)
2. Mollenhauer, H.H., Tecnología de marcaje 39 11 (1964)
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Sunday May 20, 2012
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